BIO-RAD CFX Maestro v4.1免費版

BIO-RAD CFX Maestro是一個化繁為簡的BIO-RAD定量PCR數(shù)據(jù)處理大師，軟件能夠操作所有CFX系列實時定量PCR儀，進行實驗設置、儀器操作和數(shù)據(jù)分析，軟件全面整合了數(shù)據(jù)采集、統(tǒng)計學分析(t- 檢驗、方差分析)和用于出版發(fā)表的結(jié)果導出功能，為實時定量 PCR 儀實驗提供了一站式的解決方案。

軟件應用

背景簡介：

肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)，俗稱“漸凍人”，是一種運動神經(jīng)元疾病，病人表現(xiàn)出因上運動神經(jīng)元和下運動神經(jīng)元變性所致的肌無力、肌萎縮等癥狀。為研究其是否存在細胞自噬的病理，研究者將ALS患者和其他非ALS類型包括包涵體肌炎(inclusion body myositis，IBM，一種慢性炎癥性肌病)樣本等進行比較。觀察ALS病理的一種已知標志物磷酸化TAR DNA結(jié)合蛋白43(pTDP-43)以及調(diào)節(jié)細胞自噬的P62蛋白的特異性表達情況。除用到免疫組化、免疫熒光的方法外，研究人員也對這兩種蛋白對應的基因TARDBP 和SQSTM1 進行了qPCR實驗分析比較，以下是具體的過程。

樣本設置：

ALS樣本組——ALS1-ALS5共5個生物學重復;

IBM樣本組——IBM1-IBM3共3個生物學重復;

陰性對照組——MSC1-MSC3共3個輕微神經(jīng)源性肌萎縮樣本生物學重復;

空白對照——1個無模板對照

基因設置：

2個目的基因——TARDBP，SQSTM1;

2個參考基因——GAPDH，RPS18;

所用到的染料法引物對均來自于Bio-Rad提供的PrimePCR Assay。

板面布局：

12個樣本×4個基因，1個96孔板做2個重復，共做2個96孔板(即2個批次實驗，各4個技術(shù)學重復)。

數(shù)據(jù)分析方法：

將TARDBP 和SQSTM1 表達用兩個參考基因(GAPDH，RPS18)進行均一化，兩組患者分別與對照組進行相對均一化基因表達比較，顯著性檢驗采用非配對t 檢驗。